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酸性蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化

来源:56doc.com  资料编号:5D121230118  文件类型:  资料等级: %D7%CA%C1%CF%B1%E0%BA%C5%A3%BA5D121230118
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资料介绍

酸性蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化(毕业论文10000字)
摘  要:以酪素为唯一氮源,从浏阳河畔土样筛选出一株酸性蛋白酶产生菌Lin-10,该菌经革兰氏染色鉴定为革兰氏阴性菌,通过单一因子实验对该菌株进行发酵条件的优化,得出最适碳源为2%玉米粉、最适氮源为0.6%硫酸铵,在初始pH  6.0、发酵温度32 ℃的条件下发酵培养2 d,酶活能达778.53 IU/ml,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳初步测得该酶的分子量为28kDa。
关键词:酸性蛋白酶;革兰氏阴性菌;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳; 

【本文来自56doc.com QQ:869918441】

Screening A Strain Of acid Protease And Optimizing Fermentation Conditions
Abstract:A acid protease producing strain Lin-10 was screened by casein medium(casein as unique nitrogen source) from soil near Liu Yang River. Lin-10 was identified as gram-negative bacterium. Fermentation conditions for secreting protease were optimized by single factor experiment. The results showed the protease activity reached 778.53 IU/mL when Lin-10 was cultured under conditions:carbon source 2% corn flour, nitrogen source 0.6% ammonium sulfate, initial pH of medium 6.0, culture temperature 32℃, fermentation period 2 days. The molecular weight of protease from strain Lin-10 was 28 kDa estimated by method SDS-PAGE.
Key words:acid protease; gram-negative bacterium; SDS - polyacrylamide gel electrophoresis; 
 酸性蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化
目    录
摘要……………………………………………………………………………1
关键词…………………………………………………………………………1
1 前言……………………………………………………………………………1
1.1  酸性蛋白酶国内外研究进展…………………………………………………2
1.2  酸性蛋白酶的生产及条件优化………………………………………………2
1.3  酸性蛋白酶的应用前景…………………………………………………………3
2实验材料与方法………………………………………………………………………3
2.1实验材料………………………………………………………………………3
2.2主要药品与试剂………………………………………………………………3
      2.2.1  药品………………………………………………………………………3
      2.2.2  试剂………………………………………………………………………4
2.3主要仪器………………………………………………………………………4
2.4酸性蛋白酶产生菌的筛选……………………………………………………5
      2.3.1  采集样品及土壤样品的富集培养…………………………………5
      2.3.2  初筛…………………………………………………………………5
2.3.3  复筛………………………………………………………………………6
2.3.4  菌种的鉴定………………………………………………………………6
2.4  酸性蛋白酶产生菌发酵条件的优化…………………………………………6
2.4.1  酶活力定义………………………………………………………………6
2.4.2  标准曲线的制作…………………………………………………………6
2.4.3  酸性蛋白酶酶活力的测定 ………………………………………………7
2.4.3  单因子实验………………………………………………………………7
2.5  SDS-PAGE法测定酸性蛋白酶相对分子质量………………………………8
2.5.1  SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 …………………………………………8
2.5.2  凝胶的制备 ………………………………………………………………8
2.5.3  电极缓冲液的选择 ………………………………………………………9
2.5.4  电泳 ………………………………………………………………………9
2.5.5  染色于固定 ………………………………………………………………9
2.5.6  脱色 ………………………………………………………………………9
3  结果与分析………………………………………………………………………9
3.1  酸性蛋白酶产生菌的筛选 ……………………………………………………9
  3.1.1  初筛 ………………………………………………………………………9
  3.1.2  形态学研究………………………………………………………………10
3.2  单一因子实验研究……………………………………………………………10
  3.2.1  酸性蛋白酶产生菌发酵周期的测定……………………………………10
  3.2.2  最适氮源、碳源的筛选 …………………………………………………11
  3.2.3  温度对酸性蛋白酶产生菌发酵的影响…………………………………12
  3.2.4  初始PH对酸性蛋白酶产生菌发酵的影响………………………………13
3.3  SDS-PAGE电泳研究……………………………………………………13
4实验结论……………………………………………………………………………14
参考文献 ………………………………………………………………………14
致谢……………………………………………………………………………14
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